大豆異黃酮是大豆生長中形成的一類次級代謝產(chǎn)物。由于是從植物中提取，與雌激素有相似結(jié)構(gòu)，因此稱為植物雌激素。大豆異黃酮的雌激素作用影響到激素分泌、代謝生物學(xué)活性、蛋白質(zhì)合成、生長因子活性，是天然的癌癥化學(xué)預(yù)防劑。異黃酮是一種弱的植物雌激素，大豆是人類獲得異黃酮的惟一有效來源。
本文選取我國居民日常食用的主要豆制品，對其中雌激素樣活性較強(qiáng)的染料木素和大豆苷元以 及它們對應(yīng)的糖苷進(jìn)行定量檢測，從大豆異黃酮的組成和含量兩方面進(jìn)行分析評估，進(jìn)而了解我國豆制品中大豆異黃酮含量的基本情況，為以后全面深入的研究奠定 基礎(chǔ)。由于食品中大豆異黃酮的檢測尚無國家標(biāo)準(zhǔn)，因此選用較通用的液相色譜法為本研究的檢測方法。
1 材料與方法
1.1 材料與試劑
標(biāo)準(zhǔn)品；大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素；正己烷、甲醇(分析純)；甲醇(色譜純)。
1.2 儀器與設(shè)備
Waters 1525液相色譜儀，系統(tǒng)包括515HPLC雙泵、Waters 2996光電二級管列檢測器；DZG-6050真空干燥箱；KQ-2200超聲波清洗器。
1.3 方法
1.3.1樣品制備
固體樣品10～45 g，粉碎，55℃真空干燥24h，進(jìn)一步粉碎，每份稱取0.2 g；加5mL正己烷，超聲脫脂10 min，離心(3 000 r/min，3 min)。棄去正己烷；加10mL 80％甲醇，超聲萃取10min，離心(3 000 r/min，3 min)，轉(zhuǎn)移上清液，通風(fēng)櫥中70℃水浴揮發(fā)至干，80％甲醇復(fù)溶至0.4mL，過膜，待測。
液體樣品10 mL；加2.5 mL正己烷，超聲萃取10 min，靜置，棄去上層脂肪層。取2 mL溶液。加8 mL甲醇，超聲萃取10 min，離心(3 000 r/rain，3 min)，轉(zhuǎn)移上清液，通風(fēng)櫥中70℃水浴揮發(fā)至干，80％甲醇復(fù)溶至0.4 mL，過膜，待測。
1.3.2 HPLC條件
色譜柱為kromasil C18柱(4.6minx250mm，5um)；流動相為甲醇(A)/水(B)，梯度洗脫條件：0-15 min，30％～70％B，15～30 min。70％-30％B；流速0.6 mL/min；柱溫25℃；進(jìn)樣量20uL；檢測波長254 nm。
1.3.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
稱取4種對照品各5 mg左右，然后分別置于10 mL容量瓶中，80％甲醇溶解，定容、搖勻，配成約0.5 mg/mL貯備液。再由貯備液分別配成約2、4、8、16、32、64、128 mg/L的7個濃度梯度工作液，HPLC檢測。
2 結(jié)果與分析
2.1 方法學(xué)考察
由分離結(jié)果圖1可看出，在此色譜條件下4種化合物分離良好，保留時間合適。
2.1.1線性關(guān)系及檢出限
由表l回歸系數(shù)可看出，在2～128 mg/mL濃度范圍內(nèi)。各峰線性關(guān)系良好，可用于定量分析。進(jìn)樣量為20uL時，大豆苷(D)、染料木苷(G)、大豆苷元(Da)、染料木素(Ge)的zui 低檢出濃度(以S/N≥3計)分別為：0.200、0.015、0.400、0.0060ug/mL。
2.1.2重現(xiàn)性
每類樣品選1個樣，每個樣稱取同等質(zhì)量5份。按上述方法制備后對每份樣做含量檢測，檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)每類樣品中。4種化合物含量的RSD值均≤2.58％，說明此方法重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確度高。
2.1.3精密度
每類樣品選1個樣，連續(xù)進(jìn)樣6次，檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)每類樣品中，4種化合物含量的RSD值均≤2.78％，說明此方法重現(xiàn)性好，精密度高。
2.1.4回收率
每類樣品選1個樣，在測得已知含量的樣品溶液中，按方法學(xué)原則，在0.5～2倍之間取3個濃度0.5、l、2，加標(biāo)，測3次，計算回收率。每類樣品在不同 加標(biāo)倍數(shù)下，4種化合物的回收率范圍分別為D:88.30%-105.53%。G:84.92%-l 13.7%，Da:93.07%-115.76%，Ge:91.18%-107.92%。RSD范圍：1.22%-3.56%。說明此方法加標(biāo)回收率較 好，準(zhǔn)確度較高。
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